◆ 荧光定量PCR（RT-qPCR）检测（含内参）                         服务编号：FW04

一、荧光定量PCR原理简介

实时荧光定量PCR是利用荧光染料（具有双链DNA亲和性）或荧光标记短核苷酸探针（利用Taq酶的5’→3’外切酶活性）的荧光活性，在PCR 反应的的过程中，每个循环收集一个荧光强度信号。随着PCR 反应产物量的增加，荧光信号强度也等比例增强。RT-qPCR反应完成后通过对PCR 扩增反应中每一个循环后荧光信号强度变化的监测可得到一条荧光扩增曲线图，进一步可计算出相对应的产物量的变化，从而实现对起始模板定量及定性的分析。

二、服务内容

1、从动物细胞、人或动物组织、细菌、植物、血清、土壤等样品中提取核酸

2、对核酸进行浓度及纯度分析

3、荧光定量PCR检测

（1） 引物和探针的设计与合成

（2） 绝对定量和相对定量的选择

（3） 探针法和染料法的选择

（4） 荧光定量PCR仪对目的基因的检测

（5） 数据统计和分析

4、预实验服务：根据客户提供的目的基因序列或NCBI序列号提供客户引物和探针，并筛选出最优化的引物和探针。

5、正式实验服务：根据预实验筛选的引物和探针对所用样品进行荧光定量PCR的检测，并对结果进行统计和分析。

5、免费进行相对荧光定量PCR内参基因的检测

三、样品要求（样品处理及保存见附件）

1、细胞＞1×10⁶；组织＞50 mg；细菌湿重＞50 mg；植物＞100 mg；血清＞50 µl；土壤干重＞200 mg

2、样品蛋白浓度＞1 mg/ml，蛋白量＞200 µg/样品

四、收费标准

四、客户提供材料

1、新鲜或正确保存的样品（-80保存或加入Trizol后-20保存）

2、目的基因序列或NCBI序列号

3、阳性对照样品（尽量提供）

4、相关文献（可选）

五、提交给客户结果

1、预实验引物筛选结果（相同样品不同引物溶解曲线图）

2、正式实验结果（所用样品溶解曲线图，Ct值，拷贝数（绝对定量），扩增效率，标准曲线（绝对定量），标准品质粒和菌株（绝对定量），样品统计分析结果）

3、引物，探针及其序列

4、完整实验报告

六、服务项目说明

1、选择部分样品进行预实验，参考目的基因2-3个引物进行预实验；

2、向客户反馈预实验结果，等待客户确认预实验结果后确定是否进行正式实验

3、请您提供正确的基因序列或NCBI序列号以供引物设计和探针设计，也可以根据客户提供的引物和探针序列直接合成后进行实验。引物由我们免费进行合成，探针合成的费用请参照“收费标准”

4、建议提供目的基因阳性表达样品（DNA，cDNA、有阳性表达的细胞或组织、商品化的阳性对照产品等）作为阳性对照。阴性对照如无特殊说明均为无模板对照

5、免费内参检测为：beta-actin，beta-tubulin，gapdh，如果需要其它基因作为内参需要提前说明并按样品数目收取费用，参照“收费标准”

6、双方签订合同后，收取70%首付后启动预实验

7、荧光定量PCR特殊要求请咨询